TRASFERIMENTO GENICO MEDIATO DA DNA

il DNA da trasfettare nella cellula deve essere inserito in virus o in plasmidi.

APPLICAZIONI:
- Espressione di geni ricombinanti:
. conferma attività del gene clonato;
. espressione di geni che richiedono modificazioni post-traduzionali complesse.
. studi su biosintesi proteica e trasporto intracellulare
. studi struttura/attività (mutazioni)
. interazioni proteina-proteina
. interazioni proteina-DNA
. studi di elementi di DNA convolti nell'espressione genica
. studi di leganti naturali e sintetici

- produzione di linee cellulari con marker genetico

- perturbazione delle normali funzioni cellulari (studio del ciclo cellulare, fenotipo, ecc.)

- clonazione di nuovi geni (raro)

TIPI DI TRASFEZIONI CELLULARI

MEDIATA DA VIRUS:

Simian virus 40 (SV40);
adenovirus;
retrovirus;
baculovirus

(il baculovirus viene usato per infettare un --> verme).

MEDIATA DA PLASMIDI:

1) TEMPORANEA (TRANSIENTE)

2) STABILE

utilizzano entrambe le stesse metodiche di trasfezione; la trasfezione stabile si ottiene dopo quella transiente se è disponibile un marker per selezione (NEO)

 

MEDIATA DA VETTORI VIRALI MODIFICATI (TUMORIGENICI):

CELLULE IMMORTALIZZATE PER TUMORIGENESI DIRETTA es. CELLULE GT1